淺析肌聯(lián)蛋白抗體檢測試劑盒的使用流程
更新時間：2025-01-10 點擊次數(shù)：127次
肌聯(lián)蛋白抗體檢測試劑盒是一種用于檢測人血清或血漿中肌聯(lián)蛋白抗體(TitinAb)的實驗工具。該試劑盒在臨床上具有重要的應(yīng)用價值，尤其在重癥肌無力(Myasthenia Gravis,MG)和胸腺瘤等疾病的診斷中，主要用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中的肌聯(lián)蛋白抗體含量，試劑盒應(yīng)保存在2-8℃的環(huán)境中，有效期為6個月。
肌聯(lián)蛋白抗體檢測試劑盒通常采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。這種方法通過預(yù)先包被豚鼠肌聯(lián)蛋白抗體(TTN)捕獲抗體的微孔板，依次加入標本、標準品和HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌后，用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺與樣品中的肌聯(lián)蛋白抗體濃度呈正相關(guān)，通過酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，即可計算出樣品濃度。
在使用肌聯(lián)蛋白抗體檢測試劑盒時，需按照以下步驟進行：
1.加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl。注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
2.溫育：用封板膜封板后，37℃反應(yīng)120分鐘。
3.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干。每孔加生物素標記抗體工作液100μl，37℃溫育60分鐘。再次洗滌后，每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液100μl，37℃溫育60分鐘。洗滌5次。
4.顯色：依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色30分鐘。
5.終止：依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)。
6.測定：用酶標儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。
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