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　　重癥肌無(wú)力（myastheniagravis，MG）是一種T細(xì)胞依賴的乙酰膽堿受體抗體（AChR-Ab）介導(dǎo)的自身免疫性神經(jīng)肌肉接頭處的疾病。MG的基本病理機(jī)制是AChR-Ab介導(dǎo)的神經(jīng)肌接頭終板突觸后膜上乙酰膽堿受體（AChR）數(shù)量的減少。乙酰膽堿受體抗體是MG主要的自身抗體，由自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞激活體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。FcyRIIB是細(xì)胞表面免疫球蛋白IgG的Fc段受體之一，是一個(gè)能與IgG的Fc段低親和力結(jié)合的抑制性受體，也是表達(dá)于B淋巴細(xì)胞表面的免疫球蛋白受體，在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中具有重要作用。

　　重癥肌無(wú)力抗體的測(cè)定步驟如下：

　　1.抗原包被：用PH值9.6的碳酸鹽/碳酸氫鹽緩沖液將純化的AChR以0.5ug/ml的濃度進(jìn)行稀釋，按每孔0.1ml小心加入酶標(biāo)板各孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。然后用封板膜封好反應(yīng)孔，放在4℃冰箱中12小時(shí)過(guò)夜。

　　2.洗滌：倒盡板孔中液體，吸干孔內(nèi)殘余反應(yīng)液，空干，加滿洗滌液晃動(dòng)2min，倒去，反復(fù)4次，將反應(yīng)板倒置在吸水紙上，拍干。

　　3.封閉：在各反應(yīng)孔中加滿含2%牛血清蛋白的PH值7.4/0.01M的PBS，室溫下孵育30min。

　　4.加血清：按上述方法再洗滌4次后，在各反應(yīng)孔中加入用0.01M，PH值為7.4的PBS-Tween20稀釋100倍的MG患者的血清0.1ml，每份標(biāo)本做兩孔檢測(cè)，留2孔為空白對(duì)照。用封板膜封好各反應(yīng)孔，37℃水浴90min。

　　5.加HRP-羊抗人IgG抗體：按上述方法洗滌4次后，在各反應(yīng)孔中加入用0.01M，PH值為7.4的PBS-Tween20稀釋1000倍的HRP-羊抗人IgG抗體0.1ml，用封板膜封好各反應(yīng)孔，37℃水浴90min。

　　6.加底物：按上述方法洗滌4次，在各反應(yīng)孔中加入顯色劑A液和顯色劑B液各70ul，用封板膜封好各反應(yīng)孔。避光顯色10min。

　　7.加終止液：在各反應(yīng)孔中加入終止液50ul，終止顯色反應(yīng)。

　　8.結(jié)果判讀：根據(jù)有無(wú)顯色反應(yīng)判定結(jié)果的陰、陽(yáng)性。

　　9.終止顯色反應(yīng)30min內(nèi)在酶標(biāo)儀上讀取450mm/630mm的OD值。將MG患者的OD值減去空白對(duì)照的OD值即為結(jié)果，每份血清的結(jié)果為兩孔平均值。該結(jié)果與血清中抗AChR-lgG水平為半對(duì)數(shù)關(guān)系，OD值越高則血清中抗AChR-IgG的水平越高。