小鼠單克隆抗體制備流程
更新時間：2020-09-18 點擊次數：804次
小鼠單克隆抗體的相關內容介紹：
單克隆抗體是人工制備的雜交瘤細胞生產的，雜交瘤細胞是由一個經抗原激活后的B細胞與骨髓瘤細胞融合形成。單克隆抗體優點：純度高，靈敏度高，特異性強，交叉反應少，制備的成本低。缺點：對技術有一定的要求，而且通過抗原的化學處理很容易丟失表位。
單克隆抗體技術可應用在：蛋白質的精細結構研究、淋巴細胞亞群的表面新抗原分析、組織相容性抗原檢測、激素和藥物的免疫分析、腫瘤的定位和分類、純化微生物和寄生蟲抗原、免疫治療和與藥物結合的免疫—化學療法等。其中在免疫治療的應用中，單克隆抗體藥物發揮了重要作用：利用單克隆抗體與靶細胞特異性結合，可將藥物帶至病灶部位，可直接用于人類疾病的診斷、預防、治療以及免疫機制的研究，為腫瘤的免疫診斷與免疫治療開辟了廣闊的前景。
小鼠單克隆抗體制備流程：
1.抗原準備：原核表達蛋白抗原，或者設計合成多肽并偶聯KLH。選擇原核表達蛋白抗原的客戶，可自己提供純化好的抗原（純度>85%），拓普生物也能為你純化蛋白，從構建原核表達質粒，到獲得純化蛋白。選擇多肽偶聯的客戶，抗原由拓普生物準備，合成。
2.抗原免疫：免疫4只balb/c小鼠，并通過標準程序加強免疫，尾部采血進行ELISA檢測，驗收標準為血清ELISA>10,000。
3.細胞融合和篩選：顯示較佳免疫應答的balb/c小鼠，將其脾細胞和骨髓瘤細胞融合，通過HAT選擇性培養基篩選雜交瘤細胞。
4.雜交瘤細胞篩選：有限稀釋法對雜交瘤細胞進行篩選，對2-5個陽性母細胞進行亞克隆，并選一個亞克隆做亞型鑒定。
5.單克隆抗體大量制備：選擇一個陽性克隆腹腔注射到5只balb/c小鼠進行腹水生產。
6.單克隆抗體純化：使用ProteinA/G純化抗體，并用ELISA檢測抗體效價。
小鼠單克隆抗體注意事項：
1.請根據實驗需要選擇適工作效價，部分實驗根據具體實驗情況可在推薦工作效價基礎上進行增加或減小。
2.短期保存的抗體：如抗體幾周內就會使用，收到后推薦在2-8℃保存，2-8℃短暫保存數周對抗體活性沒有影響。
3.長期保存的抗體：如抗體需超過1個月后才會使用，請酌情分裝后于-20℃保存。
4.建議：將抗體保存在冰箱里層，避免溫度變化造成反復凍融。
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